УДК 618.15-07 DOI: 10.17816/JOWD65434-43
СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ЛАКТОБАЦИЛЛАХ ВЛАГАЛИЩА ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА
© О.В. Будиловская
■ В статье представлены современные данные о видовом разнообразии вагинальных лактобацилл женщин репродуктивного возраста и их роли в поддержании нормального микробиоценоза влагалища. Уделено внимание генотипическим особенностям некоторых видов лактобацилл и механизмам, обеспечивающим противомикроб-ную защиту вагинального биотопа. Затронут спорный вопрос о способности Lactobacillus iners обеспечивать постоянство нормоценоза микробиоты влагалища.
■ Ключевые слова: микробиота влагалища; лактобациллы; защитные свойства лактобацилл; поддержание нор-моценоза влагалища.
CURRENT VIEWS ON VAGINAL LACTOBACILLI IN WOMEN OF REPRODUCTIVE AGE
© O.V. Budilovskaya
FSBSI «The Research Institute of Obstetrics, Gynecology and Reproductology named after D.O. Ott», Saint Petersburg, Russia
For citation: Journal of Obstetrics and Women’s Diseases. 2016;65(4):34-43 Received: 04.07.2016
Accepted: 15.08.2016
Актуальность
Тело человека колонизировано огромным количеством микроорганизмов, все вместе они составляют человеческую микробиоту. Одной из важнейших задач современной клинической микробиологии является изучение микробиоты влагалища, являющейся индикатором репродуктивного здоровья женщины. Нормальная микрофлора женских половых путей чрезвычайно разнообразна и представлена аэробами, факультативными и строгими анаэробами . Слизистая влагалища является входными воротами для возбудителей урогени-тальных инфекций. Поэтому микробиота влагалища признается в качестве важного фактора защиты от различных бактериальных, вирусных и грибковых патогенов. У здоровых женщин детородного возраста вагинальный биотоп на 95-98 % представлен лактобациллами. Именно они выполняют барьерную функцию
и обеспечивают высокий уровень противоми-кробной защиты .
История изучения бактерий рода Lactobacillus
Ранее все виды лактобацилл, обнаруживаемые во влагалище и являющиеся основным компонентом его нормальной микрофлоры, называли палочками Додерлейна. Свое название они получили в честь немецкого акушера-гинеколога профессора Альберта Додерлейна. Считается, что именно ему принадлежат первые исследования по изучению вагинальной микрофлоры. В 1892 г. он опубликовал монографию, в которой описал палочковидные бактерии в вагинальных выделениях у женщин с родильной горячкой. Ему удалось культивировать эти микроорганизмы и выявить их способность к продукции молочной кислоты, ингибирующей рост патогенной микрофлоры in vitro и in vivo . Однако в отечественной
литературе первое сообщение об исследовании микрофлоры влагалища было сделано профессором Д.О. Оттом в 1886 г. В 1887 г. им была предложена теория о самоочищении влагалища. Эта теория основывается на том, что находящиеся во влагалище здоровых женщин бактерии продуцируют молочную кислоту, создающую неблагоприятные условия для другой микрофлоры. Образование молочной кислоты происходит из гликогена, содержащегося в клетках слизистой оболочки влагалища. В 1902 г. И.И. Мечников развил свою теорию о том, что старение вызывается гнилостной кишечной микрофлорой, а молочная кислота, продуцируемая лактобациллами кишечника, способна продлить жизнь .
В 1928 г. Стенли Томас идентифицировал палочки Додерлейна как Lactobacillus acidophilus, добавив пророчески, что это либо характерная группа родственных видов, либо виды, претерпевшие значительные изменения . Многими исследователями отмечались трудности при идентификации лактобацилл в связи с выраженным сходством по морфологии, физиологическим потребностям и биохимическим тестам. В 1980 г., в соответствии с наблюдениями Томаса, в доминирующем виде Lactobacillus acidophilus была обнаружена значительная гетерогенность . Альтернативным подходом в изучении многообразия лактобацилл стал анализ ДНК. В результате, используя метод ДНК-гибридизации, бактерии рода Lactobacillus были разделены на ДНК-гомологичные группы. Удалось выделить 6 групп лактобацилл, представители 4 из них встречаются в вагинальном биотопе (группа I: L. delbrueckii ssp.; группа II: L. acidophilus ssp.; группа III: L. paracasei ssp.; группа IV: L. salivarius ssp.) . Изучение внутривидового состава этих групп стало возможно благодаря уникальному открытию американского микробиолога Карла Вёзе. В 1985 г. он обратил внимание на наличие у бактерий консервативного участка гена 16S рРНК, очень удобного для определения нуклеотидных последовательностей (секвенирования) и установления видовой принадлежности бактерий . В результате в комплексе Lactobacillus acidophilus выделили несколько отдельных видов: это собственно L. acidophilus, а также L. amylolyticus, L. amylovorus, L. crispatus, L. gallinarium, L. gasseri, L. iners, L. jensenii, L. johnsoni .
Согласно современной таксономической классификации лактобациллы относят к роду Lactobacillus семейства Lactobacillaceae порядка
Lactobacillales класса Bacilli типа Firmicutes царства Бактерий.
Морфология и виды вагинальных лактобацилл
Лактобациллы — это палочковидные грам-положительные факультативно анаэробные или микроаэрофильные бактерии. В большинстве случаев они выглядят как длинные «палочки» правильной формы, также встречаются изогнутые, булавовидные формы или короткие коккобактерии. Лактобациллы располагаются поодиночке, попарно или группами в виде коротких, реже длинных цепочек. Они, как правило, неподвижны, спор и капсул не образуют. При окраске по Граму или метиленовым синим у некоторых штаммов выявляют биполярные тельца, цитоплазматическую зернистость и ис-черченность .
На сегодняшний день известно более 120 различных видов лактобацилл. В ходе реализации международного проекта «Микробиом человека» было идентифицировано 20 видов различных представителей лактофлоры, населяющих вагинальный биотоп . При этом для нор-моценоза вагинальной микроэкосистемы характерно, как правило, доминирование одного вида лактобацилл.
Из всего разнообразия вагинальных лактобацилл доминирующими являются 4 вида лактобацилл группы Lactobacillus acidophilus: L. crispatus, L. jensenii, L. gasseri и L. iners . Большинство исследователей указывает на явное преобладание L. crispatus в биотопе здоровых женщин , в то время как L. gasseri и L. iners в 4 раза чаще встречаются у женщин с бактериальным вагинозом . На сегодняшний день существуют данные о варьировании доминирующих видов в зависимости от этнической принадлежности и географического расположения . Так североамериканские ученые исследовали образцы вагинального отделяемого, взятого у 396 здоровых женщин, принадлежащих к 4 этническим группам: европейской, азиатской, африканской и латиноамериканской . Преобладание лактобацилл в составе вагинальной микрофлоры отмечалось в группе европейских и азиатских женщин (89,7 и 80,2 % соответственно), и лишь у 61,9 % африканских женщин и 59,6 % латиноамериканок доминировали лактобациллы. А вот по видовому составу L. crispatus чаще встречались только среди европейских женщин (50,6 %). В трех оставшихся группах наиболее распро-
В другом исследовании вид L. jensenii был доминирующим у американских женщин . При изучении вагинальной микрофлоры японских женщин самым распространенным оказался вид L.vaginalis . Также этот вид был достаточно распространен среди женщин африканских стран, хотя общая встречаемость вагинальных лактобацилл у них значительно ниже, чем у азиатских и европейских женщин . Шведские исследователи охарактеризовали вагинальные лактобациллы у 23 здоровых женщин и показали, что наиболее распространены виды L. crispatus (48 %), далее L. gasseri (30 %), L. jensenii (17 %) и L. iners (17 %) . У здоровых турецких женщин доминировал вид L. gasseri. 58 штаммов лактобацилл удалось получить от 10 из 19 женщин, 21 % составил вид L. gasseri, по 16 % — L. vaginalis и L. acidophilus, 14 % — L. crispatus .
Биохимические и генотипические свойства лактобацилл
В процессе своего нормального метаболизма лактобациллы способны образовывать молочную кислоту и перекись водорода. Гетероферментативные виды лактобацилл в качестве конечных продуктов также могут продуцировать уксусную, масляную, янтарную кислоты и углекислый газ. Поддержание низкого значения рН (3,8-4,4) обусловлено прежде всего образованием молочной кислоты в результате расщепления гликогена — основного пищевого субстрата лактобацилл. Гликоген вырабатывается клетками вагинального эпителия под влиянием эстрогена. Кроме того эстроген стимулирует образование рецепторов для лактобацилл на клетках вагинального эпителия .
Еще одним важным свойством лактобацилл является их способность к продукции перекиси водорода. Изучение вагинальных лактобацилл показало, что L. crispatus, L. jensenii и L. vaginalis являются наиболее часто встречающимися видами перекисьпродуцирующих лактобацилл . Отсутствие перекисьпродуцирующих лактобацилл во влагалище связано с увеличением частоты встречаемости бактериального вагиноза, с повышенным риском распространения ВИЧ через женский генитальный тракт, приобретением вируса простого герпеса II типа и преждевременными родами .
Наличие же лактобацилл, продуцирующих высокий уровень перекиси водорода, наоборот, ассоциировано с низкой частотой бактериального вагиноза и хориоамнионита при беременности .
Среди видового разнообразия лактобацилл L. iners занимает особое место. Этот вид был идентифицирован в 1999 г. . L. iners не продуцирует перекись водорода и имеет способность адаптироваться к повышенным значениям pH вагинальной среды . В мировой литературе имеются публикации по изучению генома L. iners . Он является наименьшим среди всех геномов лактобацилл, имеет 65 чужеродных генов, 26 из которых несут аминокислотные последовательности, нехарактерные для рода Lactobacillus. Вид L. iners является труд-нокультивируемым микроорганизмом и требует дополнительных ростовых факторов, очень изменчив по морфологическим и тинктори-альным свойствам. L. iners часто встречается при бактериальном вагинозе, обнаруживается у женщин при преждевременных родах. Однако частота встречаемости L. iners в качестве доминирующего вида при нормоценозе также не редкость . Но в отличие от L. crispatus L. iners не препятствует размножению условно-патогенной микрофлоры. Благодаря уникальному строению своего генома L. iners имеет способность быстро адаптироваться к меняющимся условиям окружающей среды, переключая свой метаболизм и используя в качестве пищевых ресурсов не гликоген, а другие вещества. Так, в условиях дисбиоза L. iners продуцирует холестеринзависимый цитолизин, разрушающий клеточные стенки, и использует глицерин разрушенных клеточных мембран в качестве нового пищевого субстрата . При этом происходит гибель других видов лактобацилл, снижение концентрации молочной кислоты и повышение рН вагинальной среды. Это приводит к размножению анаэробов, ассоциированных с бактериальным вагинозом, которые стремительно занимают освободившуюся нишу . Таким образом, L. iners не способны, подобно другим лактобациллам, эффективно защищать женский организм от патогенных микроорганизмов, а наоборот, предрасполагают к заселению влагалища условно-патогенной микрофлорой и катализируют процессы, инициирующие преждевременную родовую деятельность .
В последних исследованиях по изучению адаптационных механизмов лактобацилл в эко-
системе влагалища был проведен сравнительный анализ генома доминирующих видов . Установлено что L. crispatus имеет в среднем самый большой геном с наибольшим количеством белков в отличие от других вагинальных лак-тобацилл. Были найдены штаммы L. crispatus, имеющие уникальную ДНК-полимеразу, бак-териоцин- и токсин — антитоксин — системы и гены, кодирующие мобильные генетические элементы, особенно транспозазу, определяющие большие размеры генома.
В другом исследовании провели сравнительный анализ геномов 25 представителей рода Lactobacillus, обитающих во влагалище, желудочно-кишечном тракте и пищевых продуктах. Обнаружили, что геномы вагинальных лактобацилл были значительно меньше и имели более низкое содержание GC-состава, что указывает на их меньшую сопротивляемость к условиям окружающей среды в сравнении с невагинальными видами. Также выяснили, что каждый геном вагинальных видов лактобацилл кодируется специфическими белками. Эти результаты свидетельствуют о том, что вагинальные лактобациллы не имеют общих механизмов адаптации к среде влагалища. Каждый вид обладает уникальными способами взаимодействия с окружающей средой, будь то вагинальный эпителий или другие микроорганизмы в сообществе .
Роль лактобацилл в поддержании и восстановлении микробиоценоза влагалища
Лактобациллам принадлежит основная роль в поддержании постоянства микробиоценоза влагалища за счет их бактерицидной, ферментативной, витаминообразующей и иммуностимулирующей активности. Они выполняют барьерную функцию, препятствуя размножению условно-патогенных и появлению чужеродных микроорганизмов . Важным защитным механизмом лактобацилл является поддержание низкого окислительно-восстановительного потенциала вагинальной среды (рН < 4,5) за счет продукции ими перекиси водорода и молочной кислоты. В процессе жизнедеятельности они создают такую среду, что выжить рядом с ними могут только очень приспособленные микроорганизмы. Эстрогензависимая способность лактобацилл к адгезии на эпителиальных клетках влагалища помогает им обеспечивать колонизационную резистентность вагинального биотопа.
Лактобациллы покрывают стенки влагалища сплошным слоем, создавая биопленку и препятствуя адгезии других микроорганизмов. Также некоторые лактобациллы способны вырабатывать антибиотикоподобные вещества (эндобиотики) — L. acidophilus продуцирует ацидофилин и лактоцид .
Тем не менее в последнее время появились интересные данные об основных защитных механизмах лактобацилл. Так, продукция перекиси водорода вагинальными лактобациллами представляется как неоднозначный элемент защиты в естественных условиях, потому как:
1) гипоксическая среда влагалища препятствует продукции перекиси водорода; 2) высокая антиоксидантная активность цервикально-ва-гинальной жидкости блокирует бактерицидную способность перекиси водорода; 3) сама перекись водорода более токсична по отношению к лактобациллам, чем к другим 17 бактериям, ассоциированным с бактериальным ва-гинозом . В отличие от перекиси водорода молочная кислота: 1) беспрепятственно производится в гипоксической среде влагалища;
2) цервикально-вагинальная жидкость не блокирует бактерицидную активность молочной кислоты ; 3) в условиях in vitro вагинальные лактобациллы не чувствительны к молочной кислоте, которая полностью инактивирует все бактерии, ассоциированные с бактериальным вагинозом . Также выявлена выраженная активность молочной кислоты против вируса простого герпеса II типа , Chlamydia trachomatis и Neisseria gonorrhoeae . В дополнение к прямой инактивации патогенных микроорганизмов низкий рН влагалища потенцирует блокирование вирионов ВИЧ-1 цервикальной слизью. Степень защитного эффекта зависит от концентрации молочной кислоты .
Продукция бактериоцинов является еще одним важным фактором в ингибировании патогенных микроорганизмов. Бактериоцины представляют собой антимикробные пептиды и белки, активные в отношении некоторых бактерий и вирусов. Американским ученым удалось изучить трипептидный антибиотик лактоциллин, производимый одним из штаммов L. gasseri, обладающий активностью в отношении Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Gardnerella vaginalis и Corynebacterium aurimucosum .
Различные механизмы иммуномодуляции лактобацилл также содействуют поддержанию
вагинального нормоценоза. В опыте in vitro при обработке клеток вагинального эпителия агонистом toll-подобных рецепторов удалось оценить иммунный ответ некоторых штаммов L. crispatus и L. jensenii, которые привели к смягчению реакции эпителия на раздражитель . В другом опыте обнаружили, что L. crispatus незначительно стимулирует рецепторы распознавания вагинального эпителия, в отличие от L. iners, которые способствуют этому . Данный факт еще раз подтверждает уникальную способность L. iners адаптироваться к меняющимся условиям среды. Но при этом до сих пор остается спорным вопрос об участии L. iners в поддержании физиологического микробиоценоза влагалища.
Таким образом, стабильность и относительная однородность вагинальной микробиоты с преобладанием вида L. crispatus и L. jensenii создает серьезные трудности для развития патогенов, в то время как L. iners не препятствует этому, порой проявляя агрессивные свойства, не типичные для нормальной микрофлоры.
Тем не менее в составе микробиоценоза влагалища могут возникать временные сдвиги. Это может быть связано с различными факторами, такими как изменение уровня гормонов, лечение антибиотиками, сексуальная активность, гигиенические особенности. Так, в одном исследовании было показано 100-кратное снижение L. crispatus во время менструации, в то время как количество L. iners, G. vaginalis, A. vaginae и Pbivia резко возросло у женщин с нормальной микрофлорой . Противоречивый результат показывают другие исследования. При обследовании 26 женщин в различные фазы менструального цикла существенных изменений в микробиоценозе выявлено не было . Это соответствует одному из основных выводов проекта «Микробиом человека» о том, что вариации микробиоты у одного человека с течением времени меньше, чем вариации между разными людьми .
Сдвиг микрофлоры в сторону выраженного преобладания строгих или факультативных анаэробов и существенное уменьшение лактофлоры вплоть до полного ее исчезновения приводит к состоянию, именуемому бактериальным вагинозом. Это одно из наиболее распространенных заболеваний влагалища в мире, встречающееся у женщин репродуктивного возраста, у беременных и женщин, находящихся в пременопаузе. Бактериальный вагиноз представляет собой полимикроб-
ное расстройство, характеризующееся обилием таких микроорганизмов, как Atopobium vaginae, Gardnerella vaginalis, Megasphaera spp., Prevotella spp., Mobiluncus spp., Leptotrichia spp., Porhyromonas spp., Eubacterium spp., Sneathia spp., Fusobacterium spp., Veillonella spp., Dialister spp., Lachnobacterium spp., Clostridium spp., Peptostre-ptococcus spp., Eggerthella-подобные бактерии . Установлено, что эти полимикробные сообщества способны создавать биопленки на поверхности эпителия вагинального биотопа женщин, страдающих бактериальным вагинозом . Предполагается, что образование этих биопленок инициировано G. vaginalis, которая как бы является своеобразной леской для удержания других микроорганизмов . Объединенные в биопленки микроорганизмы становятся более резистентными к действию антибактериальных препаратов и защитным механизмам лактобацилл: перекиси водорода, молочной кислоте и бактериоцинам.
Еще одним вероятным, но малоизученным фактором, способным влиять на постоянство вагинального микробиома, является фаговая инфекция. С помощью молекулярно-биологи-ческих методов были обнаружены лизогенные изоляты лактобактерий. Выявление свободной фаговой частицы после индукции лизо-генных культур может говорить в пользу гипотезы о роли фаговой инфекции в развитии бактериального вагиноза и других нарушений микробиоценоза влагалища . Можно предположить, что попадание лизогенного штамма в вагинальный биотоп, плотно колонизированный лактобациллами и представленный штаммами, чувствительными к внесенному в среду фагу, может действительно привести к массовому лизису лактобацилл бактериофагами, что впоследствии приведет к размножению строгих анаэробов и развитию бактериального вагиноза.
Современные методы выявления и идентификации вагинальных лактобацилл
Клиническим материалом для выявления вагинальных лактобацилл является отделяемое влагалища. К основным методам исследования относят бактериоскопический, бактериологический (культуральный) и молекулярно-био-логический методы.
Микроскопическое исследование вагинального отделяемого является самым простым ориентировочным методом. Оно позволяет
оценить выраженность лейкоцитарной реакции, состояние эпителия и морфологические особенности микробиоты. Необходимо помнить, что обнаружение в препаратах морфоти-пов лактобацилл не дает однозначного ответа о состоянии микробиоценоза влагалища .
Для выделения культуры лактобацилл из клинического материала проводят бактериологическое исследование вагинального отделяемого. В исследовании используют жидкие и плотные питательные среды с последующим культивированием в условиях СО2-инкубатора. Видовую принадлежность выделенных штаммов лактобацилл определяют биохимическими тестами и с использованием анализаторов для считывания панелей быстрой идентификации анаэробных бактерий.
В последнее время одним из наиболее надежных и быстрых методов идентификации микроорганизмов является метод масс-спектрометрического анализа с использованием времяпролетного масс-спектрометра MALDI-TOF MS. Внедрение в клиническую микробиологию технологий, основанных на масс-спектрометрии MALDI-TOF MS (Нобелевская премия, 2002 г., Танака Коити), открыло новые возможности очень точной идентификации микроорганизмов. MALDI-TOF MS-иденти-фикация основана на определении уникального для каждого вида микроорганизмов набора белков — своеобразный «отпечаток пальца» (фингерпринтинг) микроорганизма, «протеом-ная дактилоскопия». Идентификация осуществляется в основном по рибосомальным белкам, которые присутствуют во всех микроорганизмах .
Не все лактобациллы хорошо растут на питательных средах, так, например, L. iners относится к труднокультивируемым видам. Отличить различные виды лактобацилл по характеру роста на питательной среде также весьма проблематично, а при обильном росте и вовсе не представляется возможным. В этом случае надежным методом идентификации является метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Тест-системы отечественного производства позволяют определить семь наиболее распространенных видов вагинальных лактобацилл (L. crispatus, L. iners, L. jensenii, L. gasseri, L. johnsonii, L. vaginalis, L. acidophilus) методом количественной ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени. Другие молеку-лярно-биологические методы, например ДНК-гибридизация и пиросеквенирование, позво-
ляющие провести видовую идентификацию лактобацилл, используются в основном для научных исследований.
Влияние антибиотиков на лактобациллы
Антибактериальные препараты, применяемые для коррекции дисбиотических состояний влагалища, помимо оказания терапевтического эффекта влекут и нежелательные последствия, приводящие к уничтожению резидентной микрофлоры. Известно, что уменьшение количества кишечных лактобацилл при системном приеме антибиотиков напрямую связано с уменьшением лактобацилл в вагинальном биотопе женщин. Многие клиницисты при лечении бактериального вагиноза и других дисбиозов влагалища отдают предпочтение интравагинальному пути введения противо-микробных препаратов, который не уступает по эффективности системной терапии. По данным литературы, об антибиотикочувствитель-ности различных видов лактобацилл известно, что терапия определенными антибиотиками может приводить к селективному увеличению одних видов лактобацилл и снижению или к полной элиминации других видов . Так, на примере 123 штаммов лактобацилл была изучена антибиотикочувствительность 4 основных видов: L. ^п, L. crispatus, L. jensenii, L. gasseri к 12 антибактериальным препаратам. Все штаммы оказались чувствительными к ампициллину, цефазолину, цефотаксиму, ванкомицину и нечувствительными к метро-нидазолу, триметоприму / сульфаметоксазолу и левофлоксацину. К ряду антибиотиков различные виды лактобацилл демонстрировали вариабельную чувствительность. Учитывая данное обстоятельство, можно предположить, что терапия метронидазолом, левофлоксаци-ном и триметопримом / сульфаметоксазолом не оказывает влияния на уровень колонизации вагинального биотопа часто встречающимися видами лактобацилл. В то время как лечение препаратами из группы пенициллинов, цефа-лоспоринов и гликопептидов может привести к уменьшению лактобацилл в микробиоте влагалища. Вариабельная чувствительность, возможно, может влиять на уровень отдельных видов лактобактерий в зависимости от схемы антибактериальной терапии. Так, выявлено, что лечение клиндамицином, который широко применяется для лечения бактериального вагиноза, способно полностью подавить рост L. crispatus и привести к увеличению L.
и L. gasseri . Учитывая данное обстоятельство, информированность о видовом составе лактобацилл и их антибиотикочувствитель-ности очень важна для назначения адекватной антибиотикотерапии.
Заключение
Поскольку нарушения нормального микробиоценоза влагалища могут стать причиной инфекционно-воспалительных заболеваний женского генитального тракта, инфекционных осложнений беременности и родов, бесплодия или инфицирования новорожденных при первичной колонизации, трудно переоценить значение лактобацилл в обеспечении женского репродуктивного здоровья. Много вопросов остается в отношении роли L. iners в поддержании нормоценоза влагалища. Для этого требуется проведение дополнительных исследований в группах клинически здоровых женщин с доминирующим видом L. iners в вагинальном биотопе и женщин с бактериальным вагинозом.
Литература
3. Doderlein A. Das scheidensekret und seine bedeutung fuer puerperalfieber. Zbl Bakteriol. 1892; 11:699. (In German).
4. Elias Metschnikoff L’ Immuniter dans les maladies infectieuses. Fischer Jena. 1902. (In French).
5. Thomas S. Doderlein’s Bacillus: Lactobacillus Acid-pohilus. J Infect Dis. 1928;43:218-227. doi: 10.1093/ infdis/43.3.218.
8. Woese CR. Bacterial evolution. Microbiol Rev. 1987;51(2):221-271.
17. Мелкумян А.Р. Влагалищные лактобактерии — современные подходы к видовой идентификации и изучению их роли в микробном сообществе // Акушерство и гинекология. — 2013. — № 7. — С. 18-23.
43. Рыбальченко О.В., Бондаренко В.М. Образование биопленок симбионтными представителями микробиоты кишечника как форма существования бактерий // Вестник СПбГУ. — Серия 11.— 2013. — № 1. — С. 179-186.
■ Адреса авторов для переписки-
Ольга Викторовна Будиловская — научный сотрудник лаборатории микробиологии. ФГБУ «НИИАГ им. Д. О. Отта» СЗО РАМН. E-mail: o.budilovskaya@gmail.com.
У здоровых женщин репродуктивного возраста общее количество микроорганизмов в вагинальном отделяемом составляет 107-109 КОЕ/мл и состоит из более чем 40 разнообразных видов. Основная часть из них палочки Додерляйна, лактобациллы (Lactobacillus spp.): L. crispatus, L. jensenii, L. acidophilus, L. brevis. Число лактобактерий достигает 105-107 КОЕ/мл.
Лактобактерии оказывают существенное влияние на процессы обмена веществ, обеспечивают организм человека витаминами группы В, С, К, никотиновой и фолиевой кислотами, биотином, вырабатывают аминокислоты, молочную, уксусную и другие органические кислоты, антибиотико- и гормоноподобные вещества, перекись водорода, L. fermentum № 90T-C4 продуцирует эндогенный лизоцим.
Лактобациллы обладают способностью перерабатывать гликоген в молочную кислоту, продуцировать пероксид водорода, что позволяет поддерживать постоянство рН влагалища, снижая кислотность, при этом подавляется рост условно-патогенной микрофлоры. Исследование на Lactobacillus spp, методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (Real-Time), направленно на выявление генетического материала (ДНК) для диагностики бактериального вагиноза. Этот метод характеризуется высокой специфичностью, быстрым получением результата. Он основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК. Метод применяется для диагностики бактериального вагиноза — это инфекционный не воспалительный синдром, связанный с дисбиозом вагинального биотопа, который характеризуется количественным снижением или полным исчезновением лактобактерий, и резким увеличением облигатно- и факультативно анаэробных условно-патогенных микроорганизмов, наиболее часто это Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae, а также при назначении и контроле проводимой терапии. При оценке результата надо учитывать, что выявляются фрагменты ДНК как живых, так и разрушенных микроорганизмов, поэтому результат исследования будет оставаться положительным еще в течение некоторого времени, даже если лечение было подобрано правильно.
За 10 дней до взятия биоматериала необходимо прекратить прием лекарственных препаратов и лечебные процедуры.
Мазок для женщин: не проводится взятие материала в дни менструации.
Мазок для мужчин: перед исследованием воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов.
